CARACTERIZACION DE LA REGULACION TRANSCRIPCIONAL DE LA PARAOXONASA 1 (PON1) DE HUMANO EN CELULAS DE HEPATOCARCINOMA HUMANO (HEPG2)

Abstract

La paraoxonasa 1 (PON1) humana es una A-esterasa dependiente de calcio, sintetizada principalmente en hígado y secretada a la circulación sanguínea asociada a lipoproteínas de alta densidad (HDL). PON1 actuá como una molécula antioxidante en el metabolismo de lípidos evitando su oxidación y en la detoxificación de una gran variedad de sustratos entre los que se incluyen los plaguicidas organofosforados. La variabilidad en los niveles y actividad de PON1,han sido atribuidas principalmente a polimorfismos en el gen, la dieta, estados patológicos y fisiológicos, estilo de vida y xenobióticos. Sin embargo, los mecanismos moleculares involucrados en la regulación transcripcional de PON1 han sido poco estudiados. Por lo que el objetivo del presente trabajo fue caracterizar la regulación transcripcional de la PON1 humana en células de hepatocarcinoma humane (HepG2). Se llevó a cabo un análisis in silicio de la región promotora de PON 1 para determinar elementos de respuesta (ER) a receptores nucleares (NR). Mediante PCR en tiempo real, se evaluó el efecto de algunos de los ligandos de los NR identificados en el análisis in silico sobre los niveles de mRNA de genes blancos regulados por los NR y PON1; y se determinó la actividad arilesterasa (ARE) de PON1. Los resultados obtenidos, mostraron ER a NR de pregnenolona (PXR), glucocorticoides (GR), ácido retinoico (RXR) y el receptor activador de peroxisomas alfa (PPARa) con al menos un 95% de homología. Los tratamientos con 2, 3, 7, 8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (ligando del receptor de aril hidrocarburos (AhR)), rifampicina (ligando de PXR), dexametasona (ligando de GR) y fenofibrato (ligando de PPAR) incrementaron de manera significativa los niveles de mRNA de PON1 a las 24 y 48 horas, asi como la actividad ARE de PON1 a las 24, 48 Y 72 horas. Los tratamientos con actinomicina D disminuyeron significativamente la inducción de mRNA de PON1 ejercida por los diferentes ligandos, lo cual sugiere que la inducción de mRNA de PON1 por estos ligandos es a nivel transcripcional. En conclusión, PON1 es regulada a nivel transcripcional a través de un mecanismo que involucra la activación del AhR, PXR y GR.