CHARACTERIZATION OF B7H6, AN ENDOGENOUS LIGAND FOR THE NK CELL ACTIVATING RECEPTOR NKP30, REVEALS THE IDENTITY OF TWO DIFFERENT SOLUBLE ISOFORMS DURING NORMAL HUMAN PREGNANCY

Abstract

B7H6, un ligando endógeno expresado en las superficies de las células tumorales, desencadena la activación mediada por NKp30 de células NK humanas. En contraste, la liberación de B7H6 soluble se ha propuesto como un nuevo mecanismo por el cual los tumores pueden evadir el reconocimiento mediado por células NK. Dado que las células NK son críticas para el mantenimiento del embarazo temprano, no es ilógico que el B7H6 soluble también pueda ser un factor importante para dirigir la actividad de las células NK durante el embarazo normal. Por lo tanto, este estudio se centró en la caracterización de B7H6 soluble durante el desarrollo del embarazo normal. Se obtuvieron muestras de suero de mujeres embarazadas sanas que estaban experimentando su segundo embarazo (n = 36). Además, 17 de estas participantes embarazadas fueron estudiadas longitudinalmente por la presencia de B7H6 durante su segundo y tercer trimestres. Las mujeres no embarazadas sanas de la misma edad sirvieron como controles (n = 30). La presencia de 7H6 soluble se reveló mediante transferencia de Western. Se realizó una caracterización adicional utilizando un enfoque inmunoproteómico basado en 2DE-Western blotting combinado con MALDI-MS. Los resultados muestran que los sueros de todas las mujeres embarazadas se caracterizaron por la presencia de dos nuevas isoformas de B7H6, ambas con un MW más bajo que el reportado de 51 kDa. Estas isoformas eran una isoforma pesada (∼37 kDa) o ligera (∼30 kDa) y se excluían mutuamente. La N-glicosilación no explicó completamente los diferentes pesos moleculares exhibidos por las dos isoformas, como se demostró por la desglicosilación enzimática con PNGasa F. La confirmación de la identidad y la masa molecular de cada isoforma indica que B7H6, mientras que mantiene la C y N termini, es más probable que se libere durante el embarazo por un mecanismo distinto de la escisión proteolítica. Encontramos que ambas isoformas, pero principalmente la B7H6 más pesada, se liberaron a través de exosomas; y que la isoforma más ligera también se liberó de una manera libre de exosomas que no se observó en las muestras de isoformas pesadas. En conclusión, encontramos que el B7H6 soluble se expresa de forma constitutiva durante el embarazo y que, además, el B7H6 soluble está presente en dos nuevas isoformas, que se liberan mediante mecanismos exosómicos y exosomas.